亦诺微医药创始人兼 CEO 周国瑛博士表示：对于生物医药创新来说，药物研发到临床阶段非常关键，因此我们积极寻求与行业内具备强大资源和技术积淀的企业合作，这也是我们选择 Cytiva 的原因。
不过，T2T-CHM13和目前主流使用的人类参考基因组GRCh38（Genome Reference Consortium Human Build 38）一样，主要基于单个基因组。该基因组序列源自一枚完全性葡萄胎（Complete Hydatidiform Mole, CHM），即只含有父源性基因组，而不含有母源性基因组。
团队计划到2024年年中，将样本范围扩大到350人。异染色质高度凝聚，同时充满着重复序列，这就使得测序困难，也不好对测序结果进行组装。异染色质则会被染成深色，或对福尔根反应呈阳性。而且，在涉及结构变异（Structural variation，SV）时，即基因组中发生较大片段的插入、删除、倒位或重复时，参考基因组无法正确地描述和表征。图2 不同基因组来源对GRCh38的贡献（图源：[3]）尽管地球上任何两个人基因组的相似性高达99.5%-99.9%，但显然，这不到1%的差异造就了人类的遗传多样性。
图4 47人来源（图源：[4]）相较于GRCh38，这次的结果在原先32亿碱基对的基础上新增了1.19亿个碱基对，其中，大约由9000万个来自结构变异。人类基因组计划的成果就是为科学家们提供了这样一份公认的标准——参考基因组。这是放之四海而皆准的一套方法，病毒研究不得不知（文末彩蛋：Spining飞盘开启盛夏） 2023-06-01 11:00 · 生物探索 罗伯特·科赫（Robert Koch，1843～1910年）是德国细菌学家，他提出过一套科学验证方法，验证了细菌与病害的关系，被后人奉为传染病病原鉴定的金科玉律，即科赫法则。
常用的病毒纯化方法及优缺点：由于每种方法各有优缺点，且存在一定的不可替代行，实验室内常联合使用上述方法进行病毒纯化工作。病毒样品采集/洗涤/稀释——获得滴度/含量更高的病毒。让您高效研究，安全实验。不仅如此，Eppendorf 离心机家族还能充分降低气溶胶泄漏风险，为实验人员的研究加一道安全防护。
那么，如何让病毒现身？01分离培养我们可以从DNA测序和计算生物学中学到很多东西，但在实验室里培养病毒依然非常重要，甚至是病毒研究中的里程碑式工作，从本质上讲，只有能够培养它才能有条件为未来的实验提供信息，直到充分了解它图2 全能肝细胞开创性工作(图源：[1])2022年3月，由中国科学院和深圳华大生命科学研究院牵头的体细胞诱导培养人类全能干细胞研究在Nature上发文Rolling back human pluripotent stem cells to an eight-cell embryo-like stage。
此外，在表观遗传特征、等位基因特异性转录上，TLSC也与2C胚胎接近。不过，还需要注意的是，当这些不足之处得到补足，培养出的全能干细胞获得了正常发育至足月的能力，新的伦理争议恐怕又将摆上台面。图3 研究成果（图源：[2]）研究人员还是用单细胞分析和功能丧失实验确定了多能干细胞转化为8CLC过程中的关键分子事件和基因网络，并确定了DPPA3和 TPRX1在其中的关键作用。然而，虽然多能干细胞以及胎盘、卵黄囊祖细胞的体外培养技术已相对成熟，全能干细胞的体外培养则直到最近几年才有所突破。
转录组的分析表明，TLSC和全能卵裂球样细胞与小鼠2C/4C胚胎相似，而EPSC与囊胚相似，但TLSC和全能卵裂球样细胞之间仍然在多个2C特异性基因的表达上存在可区分的差异。最终团队通过RNA测序，确定了一组不仅能够在体外实现表达2C阶段特异性基因的细胞的诱导和长期维持，还能使细胞进入最接近2C状态的化合物组合——TTNPB、1-azakenpaullone、WS6（统称为TAW）。DPPA3（Developmental pluripotency-associated 3）是卵母细胞DNA甲基化的主要调节因子，在整个8CLC转化过程中诱导DNA的去甲基化。这种由成体细胞经基因转录因子转染、小分子化合物诱导等方法获得的多能干细胞类具有类似于囊胚阶段（受精卵发育5-6天）胚胎干细胞的潜能，但又避开了胚胎干细胞的伦理争议，为再生医学、组织工程、新药开发等领域开辟了一条新的道路。
不过，在多能干细胞之上，还有一种分化潜能更大的干细胞，即全能干细胞（totipotent stem cell），具有分化形成完整个体的分化潜能。实验证明，DOT1L抑制诱导出的替代2C类状态（alternative 2C-like state）不同于2CLC，但单独抑制DOT1L不足以维持该状态，还需要配合KDM5B抑制，来重建卵母细胞/2C特异性的非典型广泛H3K4me3结构域。
2018年发表于Cell Stem Cell的一项开创性工作Capturing Totipotent Stem Cells指出，在多能干细胞组成的小鼠胚胎干细胞培养物中，也存在着少数细胞（约0.5%）具有类似于小鼠2C阶段的全能性。将TLSC接种到宿主8C胚胎中后，TLSC同样对外滋养层和内细胞团有所贡献，甚至比宿主细胞更具生长优势。
研究团队称这种方式建立的细胞为全能样干细胞（totipotent-like stem cells，TLSC）。PCH即着丝粒周围异染色质（pericentromeric heterochromatin），主要由一系列名为主要卫星（major satellite，majSat）的重复DNA序列构成。图7 王继厂团队体外培养TLSC图形概要（图源：[4]）在本文回顾的三项研究中，所培养出的细胞体系均含有多种细胞类型，因此，需要进一步明确定义其主要亚群的关键生物学特征。另外，像2C胚胎自组织形成囊胚一样，TLSC也可以自组织形成囊胚样结构，即类囊胚（blastoid）。在这项研究中，科研团队开发了一种非转基因、快速且可控的方法，从人类多能干细胞中诱导产生8C样细胞（8C-like cells，8CLC），不论在染色质可及性还是在基因表达水平上都与8C胚胎相似，成为了迄今为止在体外培养的最年轻的人类细胞。在体外培养小鼠全能干细胞方面，清华大学丁胜团队和中山大学王继厂团队则分别在Nature和Cell Stem Cell上发文Induction of mouse totipotent stem cells by a defined chemical cocktail、Chemical-induced chromatin remodeling reprograms mouse ESCs to totipotent-like stem cells，介绍了使用化学方法重塑小鼠胚胎干细胞细胞基因表达、染色质状态来诱导和维持体外2C样状态的两种方法。
在小鼠身上，只有合子和2细胞（2C）胚胎才是真正意义上的全能干细胞，而在人类和其他哺乳动物身上，这个时限会放宽到4-8细胞（4-8C）胚胎。随后的一些工作试图找出能将细胞维持在全能状态的培养条件，但这些培养系统均未能实现持久的全能性维持。
在染色质可及性和关键代谢特征方面，ciTotiSC也与小鼠2细胞胚胎高度相似。图5 丁胜团队研究（图源：[3]）丁胜团队从3000多种化合物中筛选出了能够将表达2C阶段特异性基因的细胞数量增加三倍的23种化合物，其中包括一些RAR激动剂。
2篇Nature+1篇Cell子刊：全能干细胞的体外培养进展到哪一步了？ 2023-06-01 10:43 · 生物探索 全能干细胞的体外培养则直到最近几年才有所突破。TPRX1（Tetrapeptide Repeat Homeobox 1）是一种转录因子，属于ETCHbox（Eutherian Totipotent Cell Homeobox）家族，在8CLC转化过程中调控与该过程相关的基因网络的功能和表达。
这一发现表明，在体外培养繁殖全能干细胞是可能的。图6 王继厂团队研究（图源：[4]）王继厂团队首先考察了2CLC与2C胚胎之间的差异，并提出了DOT1L抑制可通过重塑PCH来实现多能性向全能性转变的假设。图1 细胞全能性的消失（图源：Nature）全能干细胞的特性意味着其在器官体外再生、濒危物种保护、辅助生殖技术改进等领域具有诱人前景。这些类囊胚转移到假孕小鼠子宫后，超过35%发生了着床并诱导子宫内膜蜕膜化，但不会进一步发育。
在TAW处理下，被诱导出的ciTotiSC细胞（chemically induced totipotent stem cells）几乎所有经典的全能性特异性基因被激活或高度表达，而大多数多能性特异性基因被沉默，相比小鼠胚胎干细胞和先前研究中所培养出来的D-EPSC、L-EPSC、2C样细胞（2CLC）或全能卵裂球样细胞，许多其他必需的全能转录因子也在ciTotiSC中特异性激活或高度表达。王继厂团队随后比较了TLSC和全能卵裂球样细胞以及L-EPSC、D-EPSC之间的差异。
图4 8CL基因调控网络（图源：[2]）进一步的实验证实，8CLC能够在体外或体内形成类似于胚胎和胎盘的结构，相比于过去的多能干细胞无法分化为胚胎外组织，8CLC具有更全面的发育潜能。此外，这些细胞体系均未通过最严格的全能性测试，即能够独立于其他细胞类型产生新生物个体的能力。
在分化潜能上，ciTotiSC可以在体外形成滋养层干细胞，当将4-8个ciTotiSC 接种到宿主8C胚胎中时，ciTotiSC不仅参与了胎盘和卵黄囊的形成，也参与了胚胎本身所有细胞谱系的形成，甚至该嵌合胚胎能够发育成健康的活产幼崽。这种全能干细胞的状态只存在于受精卵发育的最初几天。
然而，单独激活RAR不足以建立和维持细胞的全能性，因此，丁胜团队又额外测试了一些能够增强干细胞重编程、存活和自我更新的小分子。之后，全能干细胞就开始迅速分化，形成外滋养层（outer trophectoderm, TE）、原始内胚层（primitive endoderm, PrE）之后发育成胎盘和卵黄囊用于母体与子代间物质交换，以及上胚层（epiblast, EPI）之后发育成多个胚胎器官。母体效应的缺失也有可能在一定程度上损害全能干细胞的发育。2012年，日本学者山中伸弥因发明人工诱导多能干细胞（Induced pluripotent stem cell，iPSC）技术获得诺贝尔生理学奖
EBNA1与CRYAB之间交叉抗体反应引发MS瑞典卡罗林斯卡学院临床神经科学系的博士后研究员Olivia Thomas和同事则在5月17日在Science Advances发表题为Cross-reactive EBNA1 immunity targets alpha-crystallin B and is associated with multiple sclerosis的论文。Li及其同事还发现，EBNA1的另一个区域能与一种名为泛素特异性蛋白酶7（ubiquitin-specific protease 7，USP7）的细胞酶相互作用。
CRYAB蛋白全称αB-结晶蛋白（Alpha-B Crystallin），是一种热休克蛋白，存在于人体的细胞中，并参与细胞的保护和应激响应。结果发现，在人类鼻咽癌中，81%的肿瘤样本中在11号染色体上表现出结构变异。
EBV编码的蛋白诱导11q23断裂4月12日，美国加利福尼亚大学圣地亚哥分校的博士后Julia Su Zhou Li及同事在Nature上发表论文Chromosomal fragile site breakage by EBV-encoded EBNA1 at clustered repeats。Li及其同事在原代细胞系和癌细胞系等几种EBV阴性细胞系中表达EBNA1并进行观察。
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